5分钟轻松掌握RNA富集

发布时间： 2025-09-30 浏览量：0

为什么要做RNA富集？

在总RNA中提取的众多成分中，编码及调控RNA（总RNA中的“精华”）只占5%左右，而剩下的大多是rRNA（核糖体RNA），rRNA在不同组织中表达非常稳定，对科学研究意义不大。如果不去除这些杂质，就会导致测序数据中充斥大量“无用信息”，不仅浪费时间和金钱，还可能掩盖低丰度基因的信号，影响研究结果。因此，我们通过RNA富集来“精挑细选”，只保留那些真正有用的信息，让测序效率更高，结果更精准！

RNA富集的方法和应用场景

简单来说，RNA富集分为两种：正向富集和反向富集。正向富集就像是“找宝藏”，直接用Oligo dT磁珠吸附含有polyA尾的mRNA，而反向富集则是“去杂草”，通过去除rRNA来富集其他RNA。一般来说普通真核转录组测序多偏向于富集mRNA；原核转录组和lncRNA测序需要富集除rRNA之外的其它RNA。这两种方法各有优缺点，具体选择要根据实验需求和样本类型来决定，两种方法的应用场景和富集详见下表。

RNA富集的操作流程

方法选得好，实验烦恼少。但是别高兴太早！流程同样很重要。下面简单介绍下不同方法的操作流程。

富集过程中的注意事项

细节决定成败，关注操作过程中各种注意事项，避免实验踩坑。

#小心核酸酶污染 #

实验操作时要确保环境干净，避免RNA酶污染。如果实验室里可能有RNase，可以用核酸酶清除剂来处理一下。

#使用无核酸酶耗材 #

PCR管、枪头、离心管等尽量选用无核酸酶的耗材，以免污染RNA。

#小心操作 #

在去除上清液或吸取上清液时，要避免碰到磁珠，否则会影响后续的RNA回收率。

#RNA质量要高 #

投入的总RNA纯度一定要高，否则可能会影响RNA富集效率，也可能导致RNA降解。

#精准定量 #

在富集前，一定要用Qubit RNA定量试剂盒对RNA进行准确测量，确保投入量符合要求。

#Oligo dT磁珠富集注意事项 #

a) 这种方法适合富集真核生物的mRNA，但不适合原核生物的mRNA。

b) RNA完整性要求高，RIN值最好大于7。

c) 如果投入量太大，磁珠可能会聚集，影响洗涤效果。

#rRNA去除法 #

a) 高质量的总RNA和部分降解的总RNA都可以用这种方法。

b) 在探针与rRNA杂交时，要避免漩涡振荡，而是用移液器吹吸混匀。

c) 磁珠纯化后不能过度干燥，否则会降低RNA回收率。

#保存与使用 #

由于RNA容易降解，富集后的RNA最好尽快用，如果不能马上用，可以存放在-80℃冰箱中保存。

总结一下，RNA富集看似简单，但其实是个技术活，需要细心操作。掌握了这些小技巧，你就能在科研中轻松应对各种挑战，让RNA测序结果更加精准高效！

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